论文部分内容阅读
[目的]
采用液相色谱-串联质谱(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)技术分析帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)患者和健康者血浆多不饱和脂肪酸及其代谢产物的含量差异,探讨血浆代谢物与PD的联系,为寻找诊断PD的潜在标志物提供参考。
[方法]
本实验纳入帕金森病病例组58例,健康对照组76例,收集所有研究对象清晨空腹静脉血后离心分离出血浆,使用固相萃取法提取得到脂肪酸,加入16种同位素内标,使用LC-MS/MS技术分析158种脂肪酸代谢物。运用SPSS21.0软件分析对比各组血浆代谢物差异,P<0.05代表有统计学意义。同时,利用Simca-P13.0软件建立正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型,计算变量投影重要性指标(VIP)值,结合ROC曲线筛选出潜在的生物标志物。
[结果]
1.病例组与对照组有17种差异性代谢产物,包括脂氧合酶代谢通路产物9-氢过氧-10E,12Z-十八二烯酸(9-HpODE)、13-氢过氧-9Z,11E-十八碳二烯酸(13-HpODE)、9-氧代10E,12Z-十八碳二烯酸(9-KODE)、13-羟基十八碳二烯酸(13-HODE);细胞色素P450酶代谢通路产物12,13-二羟基-9Z-十八烯酸(12,13-DiHOME)、9,10-二羟基-12Z-十八烯酸(9,10-DiHOME)、14,15-二羟基二十碳三烯酸(14,15-DHET)、11,12-二羟基二十碳三烯酸(11,12-DHET)、19-羟基二十碳四烯酸(19-HETE)、20-羧基花生四烯酸(20-carboxy-AA);非酶促途径产物11-羟基二十碳四烯酸(11-HETE )、12-羟基二十碳四烯酸(12-HETE)以及二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)、花生四烯酸(AA)、N-花生四烯乙醇胺(AEA)、油酰乙醇胺(OEA)。
2.病例组血浆中的AA、13-HODE、19-HETE含量显著高于对照组,具有统计学意义(t检验P<0.001);血浆中的12,13-DiHOME、9,10-DiHOME、14,15-DHET、11,12-DHET、20-carboxy-AA、9-HpODE、13-HpODE、9-KODE、11-HETE、12-HETE、AEA、DHA、OEA、EPA含量显著低于对照组,具有统计学意义(t检验P<0.001)。
3.中晚期PD组血浆19-HETE较早期PD高(t检验P<0.05),其余代谢物在早期PD、中晚期PD组中含量水平无显著性差异(t检验P>0.05)。
4.Logistics回归分析结果显示12,13-DiHOME、9,10-DiHOME、14,15-DHET、11,12-DHET、20-carboxy-AA、9-HpODE、13-HpODE、9-KODE、11-HETE、12-HETE、AEA、DHA、OEA和EPA为PD的保护因素,AA、13-HODE、19-HETE可能为PD的危险性因素。
5.多元统计分析中,运用OPLS-DA进行模型预测(R2Y=0.947,Q2X=0.944),其中AA的VIP值为1.75,9-KODE的VIP值为1.37,11-HETE的VIP值为1.32。其余VIP值大于1的代谢物有9-HpODE、13-HpODE、9,10-DiHOME、12,13-DiHOME、12-HETE、11,12-DHET、14,15-DHET、DHA、20-carboxy-AA、AEA。
6.AA的ROC曲线AUC值为1,敏感性和特异性分别为100%和98.7%。11-HETE+9-KODE的ROC曲线AUC值为0.988,敏感性、特异性分别为93.1%、97.4%。
[结论]
PD患者血浆中AA的含量明显升高,11-HETE、9-KODE明显降低,血浆中AA、11-HETE、9-KODE可能是PD的潜在生物标志物,多不饱和脂肪酸及代谢物含量变化可能与PD相关。
采用液相色谱-串联质谱(Liquid chromatography-tandem mass spectrometry, LC-MS/MS)技术分析帕金森病(Parkinson’s Disease,PD)患者和健康者血浆多不饱和脂肪酸及其代谢产物的含量差异,探讨血浆代谢物与PD的联系,为寻找诊断PD的潜在标志物提供参考。
[方法]
本实验纳入帕金森病病例组58例,健康对照组76例,收集所有研究对象清晨空腹静脉血后离心分离出血浆,使用固相萃取法提取得到脂肪酸,加入16种同位素内标,使用LC-MS/MS技术分析158种脂肪酸代谢物。运用SPSS21.0软件分析对比各组血浆代谢物差异,P<0.05代表有统计学意义。同时,利用Simca-P13.0软件建立正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)模型,计算变量投影重要性指标(VIP)值,结合ROC曲线筛选出潜在的生物标志物。
[结果]
1.病例组与对照组有17种差异性代谢产物,包括脂氧合酶代谢通路产物9-氢过氧-10E,12Z-十八二烯酸(9-HpODE)、13-氢过氧-9Z,11E-十八碳二烯酸(13-HpODE)、9-氧代10E,12Z-十八碳二烯酸(9-KODE)、13-羟基十八碳二烯酸(13-HODE);细胞色素P450酶代谢通路产物12,13-二羟基-9Z-十八烯酸(12,13-DiHOME)、9,10-二羟基-12Z-十八烯酸(9,10-DiHOME)、14,15-二羟基二十碳三烯酸(14,15-DHET)、11,12-二羟基二十碳三烯酸(11,12-DHET)、19-羟基二十碳四烯酸(19-HETE)、20-羧基花生四烯酸(20-carboxy-AA);非酶促途径产物11-羟基二十碳四烯酸(11-HETE )、12-羟基二十碳四烯酸(12-HETE)以及二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)、花生四烯酸(AA)、N-花生四烯乙醇胺(AEA)、油酰乙醇胺(OEA)。
2.病例组血浆中的AA、13-HODE、19-HETE含量显著高于对照组,具有统计学意义(t检验P<0.001);血浆中的12,13-DiHOME、9,10-DiHOME、14,15-DHET、11,12-DHET、20-carboxy-AA、9-HpODE、13-HpODE、9-KODE、11-HETE、12-HETE、AEA、DHA、OEA、EPA含量显著低于对照组,具有统计学意义(t检验P<0.001)。
3.中晚期PD组血浆19-HETE较早期PD高(t检验P<0.05),其余代谢物在早期PD、中晚期PD组中含量水平无显著性差异(t检验P>0.05)。
4.Logistics回归分析结果显示12,13-DiHOME、9,10-DiHOME、14,15-DHET、11,12-DHET、20-carboxy-AA、9-HpODE、13-HpODE、9-KODE、11-HETE、12-HETE、AEA、DHA、OEA和EPA为PD的保护因素,AA、13-HODE、19-HETE可能为PD的危险性因素。
5.多元统计分析中,运用OPLS-DA进行模型预测(R2Y=0.947,Q2X=0.944),其中AA的VIP值为1.75,9-KODE的VIP值为1.37,11-HETE的VIP值为1.32。其余VIP值大于1的代谢物有9-HpODE、13-HpODE、9,10-DiHOME、12,13-DiHOME、12-HETE、11,12-DHET、14,15-DHET、DHA、20-carboxy-AA、AEA。
6.AA的ROC曲线AUC值为1,敏感性和特异性分别为100%和98.7%。11-HETE+9-KODE的ROC曲线AUC值为0.988,敏感性、特异性分别为93.1%、97.4%。
[结论]
PD患者血浆中AA的含量明显升高,11-HETE、9-KODE明显降低,血浆中AA、11-HETE、9-KODE可能是PD的潜在生物标志物,多不饱和脂肪酸及代谢物含量变化可能与PD相关。